MicroRNAs（miRNAs）是一类长度约19~24nt的非编码单链RNA，通过碱基互补配对的方式与靶基因的3’UTR区部分或完全互补，剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译，从而起到转录后调控靶基因的表达。成熟的miRNAs在进化上是保守的，广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中，调控生物体生长发育和疾病发生等过程中相关基因的表达，研究人员推测，人类中三分之一的基因都受到miRNA的调控。对miRNA的深入研究，势必有利于我们对生物体生理、病理机制的理解，并为疾病的诊断和治疗中提供理论依据，具有重大的生物学意义。

 服务项目：

1.      MicroRNA表达检测

2.      MicroRNA报告基因实验

3.      MicroRNA表达服务

4.      MicroRNA功能学实验 

5.      MicroRNA表达谱

1.     miRNA表达检测

      定量检测组织或细胞样本中的miRNA是功能研究的第一步，有助于人们进一步了解 miRNA与疾病发生发展的关系，为疾病的早期诊断提供新的思路。本公司主要通过实时定量PCR(Quantitative real-time PCR)、Northern Blot方法检测miRNA的表达情况。阅微基因的技术人员通过不断的探索和努力，为您提供最优质的技术服务。

1.1 miRNA的实时定量PCR(Quantitative real-time PCR)检测

     运用成熟的Quantitative real-time RT-PCR技术快速、准确地定量检测各种组织、原代细胞及细胞系中目的microRNA的表达情况，同时也提供mRNA的实时定量PCR服务。

应用范围：

      比较癌及癌旁，病人血液及正常人血液，相同性质的不同组织 （如胃上皮、小肠上皮、膀胱上皮等各种上皮组织）中microRNA表达情况；比较过表达microRNA或抑制内源性microRNA后microRNA的表达情况。 

 服务流程：

特异的茎环逆转录引物及定量PCR引物的设计及合成

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样品总RNA的提取

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RNA定量及质量检测

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使用茎环引物进行逆转录
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qRT-PCR检测分析，得到原始数据。

特点：

1. 引物特异性好

2. 设计时间短

3. 灵敏度高

 客户提供：

      只需提供样品

公司提供：

      引物资料、引物、原始qRT-PCR数据，结果统计数据。

1.2  Northern Blotting

      MicroRNA工作的高品质文章历来注重使用Northern Blotting技术检测microRNA的表达，许多实验室限于条件及Northern Blotting杂交的难度无法完成该项工作，本公司携手国内外数个实验室推出该项服务。

 应用范围：

比较癌及癌旁，病人血液及正常人血液，相同性质的不同组织 （如胃上皮、小肠上皮、膀胱上皮等各种上皮组织）中microRNA表达情况；比较过表达microRNA或抑制内源性microRNA后microRNA的表达情况。

 服务流程：

目的microRNA杂交探针的设计及合成

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总RNA的抽提

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小RNA的分离富集

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microRNA的Northern Blotting杂交分析

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出具杂交图片

客户提供：

     只需提供样品

公司提供：

     杂交探针序列、探针、目的microRNA的杂交图片、内参Ｕ6snRNA杂交图片及条带灰度扫描结果。

2.     MicroRNA报告基因实验

      本公司采用MicroRNA报告基因试验寻找microRNA的靶基因，分为初筛及突变试验。初筛即公司根据客户需要将候选靶基因的3′UTR区构建至荧光素酶报告基因下游，然后将之与目的microRNA前体或mimic共转染293T或Hela细胞系，然后通过比较处理组与对照组的荧光素酶活性，判断该基因是否为目的microRNA的靶基因。其后，通过突变试验构建已突变靶位点的荧光素酶报告基因载体，然后继续使用荧光素酶报告基因试验验证初筛的结果。

      本公司所用到的荧光素酶报告基因载体为pGL3或pRL-TK。

 服务流程：

(1) 初筛： 

构建microRNA前体载体、含靶位点的荧光素酶报告基因载体及对照载体

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转染293T或Hela细胞系

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比较处理组与对照组的荧光素酶活性

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确定目的microRNA的靶基因

(2) 突变实验：

构建microRNA前体载体、含突变靶位点的荧光素酶报告基因载体及对照载体

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转染293T或Hela细胞系

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比较处理组与对照组的荧光素酶活性

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确定目的microRNA的靶基因，验证初筛结果。

客户提供：

     microRNA前体（Ambion公司）或mimic (Dharmacon公司)与对照寡核苷酸（即对照前体或control mimic）。

公司提供：

      靶基因资料、靶基因质粒（如客户需要且另计费）、原始报告基因数据，结果统计数据。

3.     MicroRNA表达服务

      MicroRNA表达试验是研究microRNA功能的重要手段，虽然使用 microRNA前体或mimic也能达到相同效果，但价格昂贵且无法重复使用。本公司已开发一种可表达成熟 microRNA的荧光素载体pRED-MIR，其携带的红色荧光可指示转染效率，筛选稳定表达目的microRNA的细胞系，并可反复扩增使用。

 服务流程：

构建荧光素载体pRED-MIR

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构建好的载体进行测序

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转染Hela或293T细胞

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qRT-PCR检测目的microRNA的表达情况

客户提供：

      目的microRNA相关信息

公司提供：

      MicroRNA表达载体质粒、质粒测序图、质粒转染Hela或293T细胞后原始QRT-PCR数据。

4.     MicroRNA功能学实验

服务项目：

(1) 细胞增殖试验

(2) 细胞凋亡试验

(3) 细胞周期试验

(4) 细胞侵袭试验

(5) 细胞迁移试验